大家都知道影响ELISA实验结果的因素有很多，今天上海190bp踢球者即时指数为大家分享影响ELISA实验结果的其中一种因素——酶结合物！

    在ELISA实验中，用酶标记的抗体或抗原统称为结合物，此为进行ELISA检测的关键试剂。常规使用ELISA法的主要问题是能够简便地制备酶结合物，而此种制备好的酶结合物要求稳定，具有很高的酶活性，抗原或抗体的特异性，产量高及成本低。

    用什么样的酶来标记抗原或抗体呢？可根据以下几点来选择适当的酶。
    1、酶制品的纯度及活力高，催化效力也高，放大倍数大（即一个酶分子能催化几十几百个底物分子发生反应的酶）。
    2、酶及制备好的酶结合物在检测或贮存中能保持稳定。
    3、酶制剂易得、价廉.
    4、既要适用于标记抗原，又适用于标记抗体，标记后不影响抗原或抗体的免疫学特性，也不降低酶的活性。
    5、酶的反应产物稳定，检测时简便、快速。在定量测定中产物必须是可溶性的。
    6、要有安全、价廉、易得的底物。

    符合上述条件的酶有：碱性磷酸酶，一般用分子量为5×105（Alkaline Phospatase,简称AP），辣根过氧化物酶（Horse Radish Peroxidase,简称HRP,分子量为4×104）,另外尚有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖甙酶，糖化酶及乙酰胆碱酯酶等等。其中以前两种（AP和HRP）zui为常用。
    AP活力高，制备好的酶结合物可加NaN3防腐，但此种酶不易获得，因其是从小牛肠粘膜中或大肠杆菌中提取，而且价格比较昂贵。因此，目前国内外大多使用HRP。HRP活性也高，价格较便宜。但制得酶结合物不能加NaN3防腐。因NaN3能抑制HRP的活性，但可作低温保存或加60%缓冲甘油等量混合后少量分装，保存冰箱，一般可用1-2年。

    由于HRPzui为常用，故先把HRP的一般性质介绍一下，以便在制备酶结合物时可引起注意。
(HRP的性质):HRP系从辣根菜的根中所提取，这种酶是无色酶蛋白与暗棕色的铁卟啉（E铁血素）相结合的一种醣蛋白，可简写成由多个（6-7个）同功 酶所组成。分子量约为40000，等电点为PH7.2。能被58-62%饱和硫酸铵沉淀，在PH3.5-12均较稳定。63℃15分钟，室温数周、甲苯和其他苯类有机溶剂处理都不影响它的活性。