中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移动、吞噬杀菌等,是机体天然免疫力的重要组成部分。 试剂及材料 1. 白色葡萄球菌 2. 肉汤培养基 3. 硷性美蓝液 ELISA试剂盒样品类型(SAMPLE TYPES): 标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清 或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。 样品采集: 收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分 激素类标本需添加抑肽酶。 ELISA试剂盒注意事项: 收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在 4 ℃ 备用,如有特殊 原因需要周期收集标本, 将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时, -20 ℃ 可保 存 1 个月。 -70 度可保存 6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。 操作方法 1. 菌液的制备 将白色葡萄球菌接种于中,放37℃温箱内培养12h左右;置水浴中加热100℃ 10min杀死细菌,用无菌生理盐水稀释成6×108 细菌/ml备用; 2. 用血红蛋白吸管吸取受试者耳垂或指血40μl,立即加入盛有20μl肝素(浓度为20U/ml)的洁净凹玻片的凹孔内,轻轻搅动混匀, 再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混匀。然后置入铺有湿纱布的有盖容器内(此容器先放37℃温箱中预温),在37℃温箱中作用30min,其间每隔10min摇匀一次; 3. 作用完毕,取1小滴混合液置于洁净无油污的载玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,硷性美蓝液染2~3min,置油镜下观察。随机计数100个中性粒细胞,分别记录发生吞噬和未吞噬的白细胞数,对有吞噬作用的白细胞,应同时记录所吞噬的细菌数; 结果分析 吞噬细胞%=即100个中性粒细胞中吞噬有细菌的细胞数; 吞噬指数=将100个中性粒细胞所吞噬的细菌总数除以100,得到每个白细胞吞噬细菌的平均数,即为吞噬指数。 |